基于Transwell的 迁移,趋化和侵袭等相关试验是研究各种生物(wù)环境中(zhōng)细胞运动性和侵袭性的重要手段。这些试验使用(yòng) Transwell培养板,该培养板包含由多(duō)孔膜分(fēn)隔的上层和下层两部分(fēn)空间组成。这些试验的基本原理(lǐ)是观察和测量细胞由上层通过多(duō)孔膜进行入下层细胞量的变化,从而深入了解细胞在不同条件下的行為(wèi)。
原理(lǐ):将具(jù)有(yǒu)迁移能(néng)力的细胞接种在Transwell培养板的上层,下层加入含有(yǒu)特定诱导剂或待测诱导物(wù)的培养基,通过测点终点的细胞迁移情况来评估细胞行為(wèi)的变化。
检测方法:Transwell中(zhōng)的细胞经过一定时间的孵育后,通过下层细胞进行固定、染色和量化统计,衡量细胞的内在运动性和对周围环境的反应。
原理(lǐ):与迁移相似,但其是用(yòng)来专门评估细胞对下腔中(zhōng)存在的化學(xué)信号(即化學(xué)吸引剂)的定向移动反应。
方法:与迁移相似,细胞向趋化诱导剂的定向迁移被量化来研究免疫反应和癌症转移的一个重要手段。
药物(wù)发现中(zhōng)使用(yòng)的趋化试验可(kě)测量细胞在化學(xué)刺激下的迁移。将细胞置于带有(yǒu)多(duō)孔膜的 96 孔板中(zhōng),通过对进入到下层细胞进行量化来评估可(kě)能(néng)影响这一过程的潜在药物(wù)化合物(wù),这在炎症和肿瘤學(xué)等领域至关重要。细胞类型和趋化诱导剂等会对结果产(chǎn)生重要的影响。
针对不同靶点的趋化试验来验证不同药物(wù)针对特定趋化因子受體(tǐ)的影响。上图结果分(fēn)别是:①THP-1 细胞上,CCR2 选择性拮抗剂RS 50439的测试结果。②在 CD4+ T(reg)细胞上对 CCR4 的强效选择性拮抗剂 AZD2098 进行了评估。③CCR8 拮抗剂 AZ084 在 H9 细胞上进行了测试。④在中(zhōng)性粒细胞上评估了 GPR84 拮抗剂 GLPG1205的活性。通过拟合细胞迁移百分(fēn)比与药物(wù)浓度的关系曲線(xiàn)图可(kě)以直观地了解这些药物(wù)在调节细胞趋化性方面的功效。
原理(lǐ):侵袭试验通过在多(duō)孔膜上引入模拟细胞外基质(zhì)(ECM)(如 Matrigel)的屏障,在细胞迁移的基础上进行了扩展。细胞必须首先降解这种 ECM 屏障,然后才能(néng)通过多(duō)孔隙进行迁移,从而模拟了组织侵袭的过程。
方法:细胞种植在上层培养室,并且在上层培养室涂有(yǒu)类似 ECM 的屏障。通过一定时间的培养后,评估细胞通过该基质(zhì)入侵并迁移到下层培养室的能(néng)力。这种检测方法尤其适用(yòng)于研究癌细胞的侵袭性和抗转移治疗。
肿瘤研究:这三种检测方法对于了解癌细胞行為(wèi),从基本的运动到复杂的侵袭机制都具(jù)有(yǒu)重要的意义。
免疫學(xué)研究:有(yǒu)助于研究免疫细胞向感染部位或肿瘤环境的迁移行為(wèi),特别是细胞趋化实验。
药物(wù)研发:这些检测方法广泛用(yòng)于评估治疗性化合物(wù)对细胞运动、趋化性和侵袭性的影响,有(yǒu)助于抗癌和抗炎药物(wù)的开发。
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