Transwell迁移实验及其类似迁移(趋化实验和侵袭实验),是研究各种生物(wù)學(xué)背景下细胞运动性和侵袭性的重要工(gōng)具(jù)。这些实验利用(yòng)Transwell插入物(wù),它由上下两个室组成,中(zhōng)间隔着一个多(duō)孔膜。这些实验的基本原理(lǐ)是观察和测量细胞通过这个膜的运动,提供细胞在不同条件下行為(wèi)的检测。
原理(lǐ):这种实验测量细胞通过多(duō)孔膜的一般迁移能(néng)力。细胞被种植在上层室,追踪它们向含有(yǒu)培养基的下层室的移动。培养基中(zhōng)可(kě)能(néng)含有(yǒu)营养物(wù)质(zhì),但不包含特定的趋化因子。
方法:在设定的孵育期后,对迁移到膜下层的细胞进行固定、染色和定量。这提供了衡量细胞固有(yǒu)运动能(néng)力和对周围环境反应的指标。
原理(lǐ):Transwell迁移实验的一个专门版本,趋化实验特别评估细胞对存在于下层室的化學(xué)信号,即趋化因子的定向移动。
方法:与Transwell迁移实验类似,细胞被放置在上层室。然而,下层室中(zhōng)填充了含有(yǒu)趋化因子的培养基。对细胞向这个趋化因子的定向迁移进行定量,从而可(kě)以研究趋化性——这是免疫反应和癌症转移中(zhōng)的一个重要过程。
趋化实验在药物(wù)发现中(zhōng)用(yòng)于测量细胞对化學(xué)刺激物(wù)的反应性迁移。细胞被放置在带有(yǒu)多(duō)孔膜的96孔板中(zhōng),其向趋化因子的移动被定量化,通常通过ATP含量来实现。这允许评估可(kě)能(néng)影响这一过程的潜在药物(wù)化合物(wù),这在炎症和肿瘤學(xué)领域至关重要。实验的具(jù)體(tǐ)细节,如细胞类型和趋化因子,可(kě)以极大地影响结果。
趋化实验针对不同靶点:上图展示了不同药物(wù)对针对特定趋化因子受體(tǐ)的趋化实验的影响。药物(wù)RS 504393,一种选择性的CCR2拮抗剂,被用(yòng)于THP-1细胞的测试。AZD2098,一种强效且选择性的CCR4拮抗剂,被评估在CD4+ T(reg)细胞上。CCR8拮抗剂AZ084被用(yòng)于H9细胞的测试。最后,GPR84拮抗剂GLPG1205被评估在中(zhōng)性粒细胞上。细胞迁移百分(fēn)比与药物(wù)浓度相对应,提供了这些药物(wù)在调节细胞趋化中(zhōng)药效的检测。
原理(lǐ):侵袭实验扩展了细胞迁移的概念,通过在多(duō)孔膜上引入模拟细胞外基质(zhì)(ECM)的屏障来实现,例如Matrigel。细胞必须首先降解这个ECM屏障,然后才能(néng)通过孔隙进行迁移,模拟组织侵袭的过程。
方法:细胞被接种在涂有(yǒu)类似细胞外基质(zhì)屏障的上层室中(zhōng)。在孵化后,评估它们穿透这个基质(zhì)并迁移到下层室的能(néng)力。这种实验特别适用(yòng)于研究癌细胞的侵袭性以及抗转移治疗的有(yǒu)效性。
癌症研究:这三种实验对于理(lǐ)解癌细胞行為(wèi)的不同方面都有(yǒu)着重要的价值,从基本的运动性到复杂的侵袭机制。
免疫學(xué):特别是趋化实验,对于研究免疫细胞向感染部位或肿瘤环境的迁移至关重要。
药物(wù)开发:这些实验被广泛用(yòng)于评估治疗性化合物(wù)对细胞运动、趋化性和侵袭性的影响,有(yǒu)助于开发抗癌和抗炎药物(wù)。
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