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PARP、PARG

PARP抑制剂作(zuò)為(wèi)潜在的癌症治疗剂，尤其是在治疗BRCA突变肿瘤方面，已经获得了突出地位。当PARP受到抑制时，具(jù)有(yǒu)缺陷DNA修复途径的细胞，如BRCA突变，变得容易受到DNA损伤，最终导致细胞死亡。这一概念被称為(wèi)合成致死性，為(wèi)肿瘤學(xué)中(zhōng)PARP抑制剂的开发铺平了道路。

PARP酶法实验

我们使用(yòng)ELISA方法检测ADP核糖聚合酶PARP家族的酶活性。组蛋白被涂覆在平板上，加入PARP蛋白（PARP1/2/3需要单链DNA断裂才能(néng)激活）以及生物(wù)素标记的NAD。随着反应的进行，PARP1在组蛋白上形成生物(wù)素标记的ADP核糖链。然后，加入链霉抗生物(wù)素蛋白标记的HRP和超灵敏检测试剂来检测信号。


我们在PARP选择性筛选方面也有(yǒu)丰富的经验。以下是我们对奥拉帕尼和AZD5305的测试数据。


PARP 捕获实验

当PARP与DNA和NAD形成复合物(wù)时，它会随着ADP核糖链的产(chǎn)生而与DNA解离。生物(wù)素标签被添加到单链DNA断裂处，PARP蛋白被His标签标记。当添加抑制剂时，PARP不会与DNA解离，从而可(kě)以检测供體(tǐ)和受體(tǐ)标签之间的荧光共振能(néng)量转移信号。


针对PARP靶点，我们启动了PARP抑制剂筛选细胞小(xiǎo)组，包括9种癌症，共70种肿瘤细胞系。这包括PARP敲除细胞系、BRCA敲除细胞株、BRCA过表达细胞系、BRCA突变细胞系、PARP抑制剂抗性细胞系和一般肿瘤细胞系。该细胞组可(kě)用(yòng)于7-14天的化合物(wù)测试，无论是作(zuò)為(wèi)单一疗法还是联合疗法，我们还根据客户需求提供定制解决方案。


与多(duō)聚ADP-核糖化相对，多(duō)聚ADP-核糖的水解在DNA损伤修复的过程中(zhōng)同样起到重要的作(zuò)用(yòng)。Poly (ADP-ribose) glycohydrolase (PARG)是多(duō)聚ADP-核糖水解酶的主要成员之一。

 

爱思益普针对PARP家族和PARG也设计并验证了一系列生化合细胞學(xué)的实验来助力化合物(wù)的筛选。

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